Elisa試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實(shí)驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結果判斷較客觀(guān)等因素，已廣泛應用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或其他抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1.     酶標儀（450nm）

2.     高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.     37℃恒溫箱

注意事項
BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì )有結晶，這屬于正�，F象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。

2.  實(shí)驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白；預處理后的樣本無(wú)需稀釋?zhuān)�直接�?0μL加樣即可。

4.  嚴格按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：80、40、20、10、5、2.5 pg/ml

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)��?份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動(dòng)洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作流程
BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；

4.  隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

結果判斷

 繪制標準曲線(xiàn)：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn)，按曲線(xiàn)方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1.  準確性：標準品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數R值，大于等于0.9900。

2.  靈敏度：檢測濃度小于1.0pg/ml。

3.  特異性：不與其它可溶性結構類(lèi)似物交叉反應。

4.  重復性：板內、板間變異系數均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6個(gè)月

BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗或人體實(shí)驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗者承擔，本公司概不負責。

2.   嚴格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗者承擔。

更新時(shí)間：2024/6/12 9:40:14