品牌: 恒遠生物貨號: HYCC30031
中文名稱(chēng): 大鼠胚胎心肌細胞
規格: T25
形態(tài)特性: 上皮樣細胞生長(cháng)
生長(cháng)特性: 貼壁生長(cháng)
培養條件:DMEM+10%FBS
傳代方法: 1:2~1:6傳代;2~3天換液1次。
凍存條件: 無(wú)血清細胞凍存液
特征特性:該細胞由Kimes B和Brandt B從BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細胞株亞克隆得到;表現出許多骨骼肌的特性。這個(gè)細胞株中的成肌細胞能融合形成多核的肌管,并對乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應。如果培養基中的血清濃度下降到1%,融合很快發(fā)生。
一、細胞收到后處理
細胞在培養瓶中培養至良好狀態(tài)后灌滿(mǎn)培養液并封好瓶口是細胞運輸的常見(jiàn)辦法。收到細胞回到自己的實(shí)驗室后,先打開(kāi)外包裝,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺內,嚴格無(wú)菌操作,培養箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀(guān)察:未超過(guò)80%匯合度時(shí),可將瓶裝的培養液收集至離心管中,加入6ml培養基,放入37℃、孵箱培養;超過(guò)80%匯合度時(shí),根據情況傳代或者凍存,具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養瓶的話(huà),處理完后放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶里面的培養基,另外一瓶用自己配的培養基),若是5%CO2的培養箱,可用密封培養瓶,擰緊瓶蓋后放入5%CO2培養箱,48H內要換液一次。
二、細胞培養步驟
1.培養皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養液。
2.無(wú)菌PBS或無(wú)菌生理鹽水洗滌3次(按培養體積加入)。
3.加入適量胰酶消化適當時(shí)間(一般胰酶為0.25%;9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶,一次加入1mL胰酶。消化時(shí)間視細胞類(lèi)型等多種情況綜合考慮,一般如果是細胞株,非原代培養,消化1-2分鐘足矣)。
4.用槍頭吹打數十次(視細胞類(lèi)型而定。一般細胞株30-50次吧,耗時(shí)一般2分鐘左右)。
5. 加入適量體積wanquan培養基終止胰酶消化(如果是9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶,可以加入1mL培養基;現在培養瓶(皿)里有2mL溶液)。
6.現在可以將溶液進(jìn)行分瓶(2mL)。如果是細胞株,直接均分到兩個(gè)培養瓶(皿)里。如果是原代培養,可以根據消化時(shí)間來(lái)對細胞進(jìn)行分離;因此可以將溶液(2mL)都轉入新的培養瓶(皿)。
7.將兩個(gè)培養瓶(皿)補足培養基到正常體積(果是9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶,為5mL培養液)。
8.鏡下觀(guān)察。剛剛傳代細胞還沒(méi)貼壁,懸浮在溶液中,呈圓形。一般2h之內會(huì )貼壁,如果已經(jīng)貼壁,根據細胞類(lèi)型有不同的形態(tài),但通常都不是圓形。
9.鏡下觀(guān)察無(wú)誤之后,再放入細胞培養箱。培養瓶(皿)放入之,可以用消毒酒精先擦一下。
10.傳代之后,第二天細胞換液一次。當然,也可以視情況而定。
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