恒遠生物主要經(jīng)營(yíng)科研試劑產(chǎn)品，現擁有各物種基因產(chǎn)品50余萬(wàn)種；重組蛋白20余萬(wàn)種；數十個(gè)種屬的多克隆抗體3萬(wàn)多種和高質(zhì)量單克隆抗體數百種。恒遠品牌自主研發(fā)ELISA試劑盒，現已涵蓋20多個(gè)種屬，數千種產(chǎn)品，涉及腫瘤、激素、自身免疫、心血管、代謝等十多個(gè)研究域。本周小編給大家帶來(lái)的是：WB實(shí)驗結果——膜上一片空白，到底是什么原因導致的呢？一起來(lái)看看吧！
一、膠和膜放反了：如果在轉印的過(guò)程中，膠和膜的位置顛倒了，那么蛋白就從膠上轉移到緩沖液中，而不會(huì )到達膜上。對于標準的轉印，凝膠應靠近三明治的負，而膜對應正。
二、轉膜效率低：轉膜效率受多種因素影響，包括蛋白的大小、凝膠中丙烯酰胺的百分比、電場(chǎng)強度、轉印時(shí)間和緩沖液的PH值。一般來(lái)說(shuō)，蛋白越大，轉移的越慢。轉移大蛋白的方法是用高的電場(chǎng)強度。而小蛋白長(cháng)時(shí)間處于高電場(chǎng)強度下可能會(huì )傳出轉印膜。避免這個(gè)問(wèn)題的方法是用0.2μm孔徑的PVDF膜進(jìn)行轉印。如果蛋白的等電點(diǎn)接近緩沖液的pH值，那么這個(gè)蛋白攜帶的電荷很少，在電場(chǎng)中頁(yè)幾乎不移動(dòng)。如果你的目的蛋白是強堿性的，那么你可以用碳酸鹽(pH9.9)、CAPS(pH11)及酸性緩沖液。
三、試劑放置太久或存放條件不正確：抗體會(huì )慢慢降解，如果反復凍融的話(huà)，它會(huì )快速降解。底物應儲存在-20℃。
四、抗體不純或滴度太低：一抗的濃度差異很大，應該根據經(jīng)驗來(lái)決定一抗的稀釋度。一般的原則是以1：100-1:1000來(lái)稀釋血清或組織培養上清，以1：1000-1：10000來(lái)稀釋腹水或超免疫動(dòng)物的血清。Bio-Rad的印跡別的二抗稀釋度是1：3000。
五、酶失活了：疊氮鈉是辣根過(guò)氧化物酶的抑制劑。不要再HRP顯色的western blot中使用任何含疊氮鈉的試劑。疊氮鈉可以用于堿性磷酸酶結合的抗體中,另外，只能使用蒸餾的去離子水。
六、使用Tween-20洗滌：Tween-20(吐溫-20)可能會(huì )干擾某些抗體-抗體相互作用，或洗去PVDF膜上的目的蛋白。因此除了封閉之后的diyi次洗滌，其他洗滌過(guò)程中都不使用Tween-20。
七、檢測系統缺乏足夠的靈敏度：確保蛋白的上樣量在檢測系統的靈敏度范圍內。
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